二组织化学和细胞化学染色法组织化学和细胞化学,是将物理和化学的技术运用到组织标本,用显微镜和化学分析方法来研究组织和细胞内的化学成分,并观察该化学成分在组织、细胞内的定位、含量及其变化规律。这些化学成分借着化学反应所产生的不溶性着色物质来显示。对于某些化学成分,例如:Fe 糖原、核酸等,可以用直接或间接的化学反应产生着色沉淀而显示其部位和相对含量。对于酶类,显示它的活性,须有该种酶的底物(被该种酶作用的物质),由酶对底物的分解,直接或间接地生成着色物质而被显示。凡是在光学显微镜下观察细胞原位显示的化学物质,称组织化学,若用电镜观察细胞原位化学成分的着色部位,则称电镜细胞化学,石蜡包埋切片制作法这是常用的切片法。以石蜡作为组织的填充支持介质,将整块组织加以包埋,后凝固成均匀一致的固态结构。用切片机制取极薄的切片。为了让石蜡能浸入组织内部,需将组织经过脱水等处理。过程大致如下:⑴固定:生物标本脱离机体或培养环境,细胞会发生自溶,腐败分解。因此,需用固定剂处理,使蛋白质凝固停止濒死或死后变化。凡供保存的标本都需经固定处理。常用的固定剂是甲醛、乙醇等,能使蛋白质凝固。还有由几种试剂配成的固定液,例如Carnoy固定液,由无水酒精、氯仿、冰醋酸配成,固定力更快更强,不含水分,可避免水溶性物质如糖原等在固定过程中损失。石蜡包埋切片的HE染色法分色后用自来水或加数滴氨水碱化,直至细胞核变成蓝色。这一步骤也可称为“蓝化”。入蒸馏水洗去碱性水分。入70%酒精→80%酒精各5分钟。入伊红染液染色30秒至数分钟。以95%酒精对伊红分色,至胞浆,结缔组织等呈桃红色。上行脱水:染色后的切片,因组织内含水而不透明,不能清晰地观察其微细结构。因此,须将组织内的水分经各级酒精→无水酒精逐步置换,后进入不含水份的透明剂内。透明:入二甲苯透明剂,二次(各数分钟)。取出切片:将组织周围多余的二甲苯擦去,滴树胶后加盖玻片封固。结果:细胞核蓝紫色,胞浆、胶原纤维、肌纤维为桃红色,嗜酸性颗粒为鲜红色,弹性纤维呈明亮桃红色。